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拮抗菌筛选的方法及其操作过程

2016-10-25技术资料

博发彩票APP下载有没有一种试剂可以杀死大肠杆菌,同时不影响酵母菌的活性

拮抗菌筛选的方法及其操作过程

拮抗菌

请问谁做过拮抗菌的分离和筛选啊?
我有几个问题想请教下:
第一:拮抗菌分离时,要分离多少株啊,我看文献是有的分离了好几百株,也有的就几十株,我想问一下,这个有什么标准吗?
第二:就是拮抗菌筛选的方法,如平板对峙法,纸片扩散法,牛津杯法,琼脂扩散法等,能否告诉一下具体的操作过程啊,最好是详细的,(一般介绍文献上有,但不具体),想请高人指点,要是有关于此操作的视频,就更好了。
第三:文献中还出现过双层平板筛选法,想知道其原理和优势及其适用对象。
 
第一:拮抗菌分离时,要分离多少株啊,我看文献是有的分离了好几百株,也有的就几十株,我想问一下,这个有什么标准吗?
首先,你要明白一点,筛菌没有固定的数量,带有一定的偶然性,当然你方法好的话,筛选的次数少,晒出来的几率大。一般筛需要上百株,报道几十株的也许有之,也许。。。
其次,筛菌要有耐性,要多观察,积累经验。
 
第二:就是拮抗菌筛选的方法,如平板对峙法,纸片扩散法,牛津杯法,琼脂扩散法等,能否告诉一下具体的操作过程啊,最好是详细的,(一般介绍文献上有,但不具体),想请高人指点,要是有关于此操作的视频,就更好了。
具体选方法或方案看你的菌的特性而定,其实平板对峙法,纸片扩散法,牛津杯法,琼脂扩散法目的一样,就是找出最好判断你菌效果的方法,使其一目了然就可看出明显区别,好为下一步实验做准备。至于具体操作,一般实验书上就很详细了。你最好在操作前自己列出实验步骤,更具具体实验边做边修改,等你做一两次,就会很熟练了。
 
第三:文献中还出现过双层平板筛选法,想知道其原理和优势及其适用对象。
双层平板也好,平板对峙法,纸片扩散法,牛津杯法,琼脂扩散法也罢,要根据你的目标生物,抑菌生物的特性而定,它们只是为你提供了良好的判断依据。
以上纯属个人意见,当否?
 
 
首先感谢你的详细指导。
另外,关于“平板对峙法,纸片扩散法,牛津杯法,琼脂扩散法的”实验书,您能推荐几本吗,由于以前是做环境微生物的,对于拮抗菌的筛选,还没涉及过,对这些方法的操作注意细节不是太清楚,如:牛津杯是插入琼脂还是直接放到上面啊?还有用打孔器转接“拮抗菌的琼脂块”是放到PDA培养基上面还是先用打孔器在PDA也打孔,然后再将“拮抗菌的琼脂块”放到已打好的孔中啊?您若是了解或是做过,还请多多指导,谢谢!
还有双层平板法,你是否用过,能否说一下其原理啊?这个我还不太明白。它与“平板对峙法,纸片扩散法,牛津杯法,琼脂扩散法的”有什么区别啊?以及其试用对象,这个有实验指导书吗,或是给我些资料什么的,我自己去看看?
问的是不是有些多啊,还请您多多指导!谢谢!
 

做拮抗试验选用牛津杯法即可.是将拮抗菌的琼脂块放到PDA培养基上面,稍压贴在平板上,然后培养.
双层平板法,最初是用于检测噬菌体的,用该法可以直观地看出噬菌体的侵染情况.原理::噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上,一般一个噬菌体产生一个噬菌斑,故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数,计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致,且清晰度高,故计数比较准确,因而被广泛应用。
平板对峙法和纸片扩散法: 主要用于纯品的抑菌试验,区别在于对峙法抑菌剂和目标菌不接触,
牛津杯法(直接测发酵液):以无菌操作在培养基表面直接垂直放上牛津杯(内径6mm、外径8mm、高10 mm的圆形小管,管的两端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),轻轻加压,使其与培养基接触无空隙,在杯中加入待检样品(发酵液),牛津杯一般可以装240微升,勿使其外溢。加满后置37℃培养16-18小时,观察结果,抑菌圈用尺直接量就可以。在培养中,一方面试验菌开始生长,另一方面抗生素呈球面扩散,离杯越近,抗生素浓度越大,离杯越远抗生素浓度越小。随着抗生素浓度减小,有一条最低抑菌浓度带,在带范围内,菌不能生长,而呈透明的圆圈,这就叫“抑菌圈”。抗生素浓度越高,抑菌圈越大。
双层平板法(主要检测噬菌体) 先在培养皿中倒入底层固体培养基,凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后,计算噬菌斑的数量。 方法:双层琼脂平板法 1 倒下层琼脂 融化下层培养基,倒平板(约10mL/皿)待用。 2 倒上层琼脂 融化上层培养基,待融化的上层培养基冷却至50℃左右时,每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液0.2mL,待检样品液或上述噬菌体增殖液0.2~0.5mL,混合后立即倒入上层平板铺平。 3 恒温培养 30℃恒温培养6~12h观察结果。 4 观察结果 如有噬菌体,则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑——¬¬¬¬噬菌斑

 

做拮抗试验选用牛津杯法即可.是将拮抗菌的琼脂块放到PDA培养基上面,稍压贴在平板上,然后培养.
双层平板法,最初是用于检测噬菌体的,用该法可以直观地看出噬菌体的侵染情况.原理::噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性 ...
非常感谢您的详细回复!想你学习了!(今天搜帖子,突然间发现这是自己的询问帖,都给忘记了
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