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从葡萄叶中如何提取DNA?

2016-09-13技术资料

我是用CTAB方法,但是做了好长时间还是没有提出来,除了叶子老点,可也不能一点也提不出来啊 

你怎么提的?具体步骤呢?
有时候细节比较重要。

恩,用的CTAB法,用液氮研磨,然后加入预冷的STE溶液离心后弃上清,加入预热的CTAB溶液,水浴后加入氯仿异戊醇,离心,取上清,重复上一步,取上清后加入预冷的异丙醇,再用酒精洗,恩,希望多给一些细节方面的指导,
 
为什么加入STE后弃上清?STE溶解DNA的。
提供一个方案:
用途: 主要用于提取生物DNA
步骤
(1) 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。
(2)取少量实验材料(约1g)置于研钵中,用液氮磨至粉状;
(3) 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液,轻轻搅动;
(4) 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中,磨碎液的高度约占管的三分之二;
(5)置于65℃的水浴槽或恒温箱中,每隔10 min轻轻摇动,40 min后取出;
(6)冷却2 min后,加入氯仿-异戊醇(24:1)至满管,剧烈振荡2~3 min,使两者混合均匀;
(7)放入离心机中10 000 rpm离心10 min,与此同时,将600 µl的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中;
(8) 10 000 rpm离心1 min后,移液器轻轻地吸取上清夜,转入含有异丙醇的离心管内,将离心管慢慢上下摇动30 sec,使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物;
(9)10000 rpm离心1 min后,立即倒掉液体,注意勿将白色DNA沉淀倒出,将离心管倒立于铺开的纸巾上;
(10)60 sec后,直立离心管,加入720 µl的75%乙醇及80 µl 5 M的醋酸钠,轻轻转动,用手指弹管尖,使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中;
(11)放置30 min,使DNA块状物的不纯物溶解;
(12)10000 rpm离心1 min后,倒掉液体,再加入800 µl 75%的乙醇,将DNA再洗 30 min;
(13)10000 rpm离心30 sec后,立即倒掉液体,将离心管倒立于铺开的纸巾上;数分钟后,直立离心管,干燥DNA(自然风干或用风筒吹干);
(14)加入50 µl 0.5 × TE(含RNase)缓冲液,使DNA溶解,置于37℃恒温箱约15 h,使RNA消解;
 

我提的时候没有“加入预冷的STE溶液离心后弃上清”这一步,研磨后加CTAB,水浴后面的步骤是一样的,能提出来。肯定是这一步的原因
 


为什么加入STE后弃上清?STE溶解DNA的。
提供一个方案:
用途: 主要用于提取生物DNA
步骤
(1) 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。
(2)取少量实验材料(约1g)置于研钵中,用液氮磨 ...
 
 
 
你好,你也是提的木本植物的叶子吗?研磨是不是很重要呢?O(∩_∩)O谢谢
 

有没有做过 提葡萄中RNA的呀

 

奥林巴斯CX31显微镜 

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