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纤维素酶总酶活和三个组分酶活力测定具体实验方法?

2016-09-02技术资料

最近需要测定细菌分解纤维素的实验,可是关于总酶活和三个组分酶活力测定具体实验方法还是不清楚!有没有虫虫有具体三个酶活力测定的具体步骤?

纤维素酶活力测定

纤维素酶活力测定文献多了去了,真懒啊

参照N.crassa or T.reesei相关文献,很简单的。

纤维素酶活力测定文献多了去了,真懒啊
就是因为看了很多文献,方法都不同一哦,而且做出来实验结果不好
 
 

我参照的是 樊程,李双江,李成磊,等。大熊猫肠道纤维素分解菌的分离鉴定及产酶性质。微生物学报(Acta Microbiologica Sinica),2012,52(9):1113-1121。


我也看了这篇文献  但是里面具体方法的细节也不是很清楚  主要是我测出来吸光值常为负的  所以很郁闷呢

我参照的是        樊程,李双江,李成磊,等.大熊猫肠道纤维素分解菌的分离鉴定及产酶性质.微生物学报(Acta Microbiologica Sinica),2012,52(9):1113-1121.
你参照做  结果怎么样呢?
 
我也是测得负值,请问你解决这个问题了吗
 
可以说一下你具体要测什么酶活吗
 
我测了很多种,LiP、Mnp、漆酶,滤纸酶活、CMC酶活、半纤维素酶活,目前测的几种都没测出来,吸光度与空白对照,要么是0,要么为负值,标准曲线我测了,可以测出来,那说明DNS问题应该不大。下面是我其中几种方法,再测酶活时有需要特殊注意的吗?

(1)全酶活(FPase)的测定

取4支洗净供干的20mL具塞刻度试管,编号后各加入50mg处理过的无淀粉新华滤纸,加入1.5 mL 0.05M pH4.8的醋酸一醋酸钠缓冲溶液,并向1号试管中加入2mLDNS溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。将4支试管同时在50 ℃水浴中预热5-l0min,再各加入适当稀释后的酶液0.5 mL,50 °C水浴中保温30 min。

(2)内切酶活(CMCase)活力的测定

取4支洗净烘干的20mL具塞刻度试管,编号后各加入1.5mL 0.5%CMCNa溶液,并向1号试管中加入2mL DNS溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。将4支试管同时在5(rC水浴中预热5-l0min,再各加入酶液0.5rnL, 50℃水浴中保温30min。并向1号试管中加入2mL DNS溶液以纯化酶活性,作为空白对照,比色时调零以上反应保温完毕后,立即取出并向2、3、4号试管中各加入2mL DNS溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴10 min,冷却后用蒸馈水定容至20mL,充分混勻。以1号试管溶液为空白对照调零点,在540nm波长下测定2、3、4号试管液的0D值,于每次测定的葡萄糖和木糖标准曲线上查处相应的葡萄糖和木糖量,计算出相应的酶活力。

 
我最近也在测纤维素酶活,CMC酶活可以测出来而且数值也很稳定,但是为什么每次测滤纸酶活都出现负值呢?一直卡在那,求大神指点下
 
我刚开始做 也是测不出来 滤纸酶活  按照国标法测得
沸水浴后 空白的颜色很深 测得所有实验组OD为负
好郁闷  
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