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尼康显微镜光谱成像与FRET生物传感器

2016-03-10技术资料

除了在去除不需要的自发荧光,可以在许多标本掩盖细节的效用,光谱成像也是分离的动态荧光共振能量转移荧光蛋白和其他荧光团的重叠发射光谱的显著优点(FRET)的实验中,这往往是复杂通过为极其快速的图像捕捉的要求。这种互动式教学探讨修改包含融合青色,而在接受时除了钙共振能量转移的变化黄色荧光蛋白焦躁生物传感器的光谱分布。

本教程初始化与钙的生物传感器(YC3.6)被呈现在图中左侧的窗口450至600纳米的光谱曲线。荧光蛋白生物传感器的卡通插图出现在图的右侧,绿色钙离子下方。青色荧光蛋白(ECFP)由青色桶表示与黄色荧光蛋白(EYFP)是由当FRET发生黄色桶表示(它是否则灰色)。从连续的10纳米波段组成一个lambda堆栈的图像呈现在主窗口下方。为了操作的教程,使用FRET进度滑块来增加钙离子浓度,并唤起了结构转变,产生FRET的生物传感器。注意在lambda栈波段作为FRET的程度增加变化到细胞核的强度。

在FRET显微镜遇到的复杂的信号被认为是为了进行共振能量转移所必需的荧光基团的过量光谱重叠的混淆。因此,除了光谱成像,以在多色固定和活细胞中分离荧光光谱的能力,该技术是独特地适于解开发射捐款在FRET成像供体和受体荧光团。配备多阳极探测器现代高性能共聚焦显微镜特别适用于FRET分析,由于其高率图像捕获,调查荧光蛋白的生物传感器是在毫秒级操作时,这是经常需要的。与32通道多阳极探测器,光谱成像共焦显微镜可以在一次扫描中两种荧光FRET收购整个光谱响应。然而,即使光谱成像能够在FRET同时检测这两种荧光团的发射信号,该技术是无法通过能量转移和信号源于直接激发产生的受体发射之间进行区分。因此,使用分别表示供体和受体的蛋白质适当的控制是必要的定量分析。在光谱成像是用来评估FRET中表达为单个多肽荧光蛋白的生物传感器的情况下,控制是不太重要的。

 

 

 

 
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